(Мол. вес 441,21)

Качественные реакции

1. Получение азокрасителя.

2. Спектр поглощения в ультрафиолете (при рН 11) имеет максимум при 255, 282 и 365 нм.

Количественное определение

При восстановлении фолиевой кислоты в солянокислом растворе цинковой пылью в числе других продуктов отщепляется пара-амино-бензойная кислота, которую диазотируют нитритом натрия. Полученная соль диазония сочетается с N-(1-нафтил)-этилендиаминди-гидрохлоридом в присутствии сульфамата аммония NH2SO2 ONH4

При этом наблюдается фиолетовая окраска раствора, интенсивность которой пропорциональна концентрации и измеряется в фотоколориметре или в спектрофотометре.

Требуются реактивы: 1) раствор желатины (1,5 г желатины и 0,1 г бензойной кислоты растворяют в 100 мл воды), 2) 10%-ный раствор соляной кислоты, 3) 0,1%-ный раствор нитрита натрия, 4) 8%-ный раствор мочевины и 5) 0,1%-ный раствор N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-аминобензойной кислоты с температурой плавления 186—187° отвешивают в стаканчике емкостью 15—20 мл, растворяют в 96%-ном этиловом спирте, переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают 3—4 раза спиртом (общее количество спирта 25 мл), раствор доводят водой до метки и перемешивают. Из этого раствора отбирают 1 мл в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 175 мл воды, 45 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 2,5 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают. В 1 мл раствора содержится 0,004 мг пара-аминобензойной кислоты.

В четыре колбы емкостью 15—20 мл вливают пипеткой 1, 2, 3 и 4 мл приготовленного раствора и доводят объем раствора в каждой колбе водой до 5 мл и прибавляют по 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, по 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита натрия, хорошо перемешивают и оставляют на 5 минут. Затем в каждую колбу прибавляют по 1 мл 8%-ного раствора мочевины, перемешивают и вновь оставляют на 5 минут. После этого в каждую колбу прибавляют по 1 мл 0,1%-ного раствора N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида, по 1,3 мл воды, перемешивают, оставляют на 10 минут и затем определяют окраски раствора" электрофотоколориметром со светофильтром 550 нм. Для получения стандартной кривой на оси ординат наносят показания гальванометра, а на оси абсцисс — количество миллиграммов и соединяют прямой линией точки пересечения перпендикуляров, восстановленных из соответствующих точек осей графика.

Определение общего количества (связанной и свободной) р-аминобензоилглутаминовой кислоты в препаратах

Точную навеску препарата (0,049—0,050 г) в стаканчике емкостью 15—20 мл смачивают несколькими каплями воды и растворяют в 0,1 н. растворе едкого натра. Раствор переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают несколько раз 0,1 н. раствором едкого натра, сливая промывную жидкость в ту же колбу. Объем раствора доводят 0,1 н. раствором едкого натра до метки и хорошо перемешивают. Из полученного раствора отбирают 1 мл в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляют 75 мл воды, 18 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 1 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают (раствор А).

К 75 мл раствора в конической колбе емкостью 150 мл прибавляют 0,5 г цинковой пыли и оставляют на 15 минут при частом перемешивании. Раствор фильтруют через сухой фильтр в сухую колбу, отбрасывая первые 15—20 мл фильтрата. К 2 мл фильтрата в колбе емкостью 15—20 мл прибавляют 3 мл воды, 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты и далее поступают, как указано при получении стандартной кривой.

Определение свободной п-аминобензоилглутаминовой кислоты

К 2 мл раствора А в колбе емкостью 15—20 мл добавляют 8 мл воды и далее поступают, как описано при определении общего количества пара-аминобензоилглутаминовой кислоты. Содержание фолиевой кислоты в граммах (х) вычисляют по формуле