Главным признаком, используемым при отношении протеолитических ферментов к тому или иному классу, является строение каталитического центра.
Отправной точкой в изучении строения активного центра, механизма катализа является идентификация функциональных групп, что достигается комплексными исследованиями и, в первую очередь, применением специфических ингибиторов. В наших опытах в качестве ингибиторов были использованы ЭДТА, монойодуксусная кислота, n-хлормеркурийбензоат натрия, фенилметилсульфатонилфторид, диизопропилфторфосфат, перманганат калия.
Растворы ферментов, содержащие 5×10-3М этих соединений, выдерживали при 30оС в течение одного часа.
Как показали результаты опытов, протеиназа 1 полностью инактивировалась ЭДТА – ингибитором металлоферментов, остальные ферменты не изменяли протеолитическую активность.
Протеиназа 2 инактивировалась монойодуксусной кислотой и n-хлормеркурийбензоатом натрия на 84 и 63% соответственно. Фермент терял активность при воздействии фенилметилсульфатонилфторидом и диизопропилфторфосфатом, это даёт возможность предположить, что протеиназа 2 относится к «сериновым». Не оказывал влияния не на одну из протеиназ перманганат калия, что свидетельствует об отсутствии в активном центре карбоксильной группы.
На основе полученных данных можно предположить, что протеиназа 1 относится к «металлоферментам», а протеиназа 2 – к «сериновым».
В дальнейшем было интересно рассмотреть влияние на протеиназы гистидина. На протеиназу 2 он не оказывал ингибирующего действия, в то время как полностью ингибировал протеолитическую и коллагеназную активности протеиназы 1. Из литературы известно, что гистидин является ингибитором коллагеназ. В связи с чем очевидно, что протеиназа 1 является ферментом, проявляющим свойства протеиназы с коллагеназным действием
К специфическим реагентам относятся также ионы металлов. Они могут оказывать ингибирующий или активирующий эффект. В наших опытах мы использовали соли двухвалентных металлов в виде хлоридов и концентрации 0,005М. Фермент выдерживали в соли, а затем определяли остаточную активность. Ионы Mn2+, Ca2+, Ba2+ практически не оказывали никакого влияния на активность обеих протеиназ; Zn2+, Co2+ незначительно ингибировали оба фермента, ионы Cd2+, Cu2+ ингибировали протеиназу 1, а протеиназа 2 ингибировалась ионами Fe2+, Ni2+, Cd2+, Cu2+ . Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4.
Влияние ионов металлов на активность протеиназ Penicillium wortmannii 2091.
Ион металла С=0,005М |
Ферментная активность, % от исходной. | |
Протеиназа I |
Протеиназа II | |
Mn2+ |
100,0 |
95,39 |
Ca2+ |
100,0 |
100,0 |
Ba2+ |
100,0 |
100,0 |
Zn2+ |
95,2 |
95,2 |
Co2+ |
93,9 |
95,2 |
Cu2+ |
34,5 |
19,2 |
Cd2+ |
20,4 |
20,8 |
Ni2+ |
98,5 |
67,5 |
Fe2+ |
97,9 |
44,9 |
Классификация взрывов по плотности вещества, по типам химических реакций
Горение - с детства и
навсегда поражающий наше воображение феномен природы - несомненно один из важнейших
для природы и человеческой практики физико-химических процессов. Греческий миф о
Пр ...
Радиометрическая и радиохимическая экспертиза
...
Обсуждение результатов
Таким
образом, в предыдущих разделах рассмотрен материал, включающий различные методы
получения гетероциклических соединений реакциями замыкания цикла, свойства,
общую информацию, применение и полу ...